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Antigenicidad de la hemaglutinina del virus influenza porcina subtipo (H1N1) clásico como candidato a vacuna en un vector de expresión en células de mamífero

Echeverry Muñoz, Diana Marcela (2012) Antigenicidad de la hemaglutinina del virus influenza porcina subtipo (H1N1) clásico como candidato a vacuna en un vector de expresión en células de mamífero. Maestría thesis, Universidad Nacional de Colombia.

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Resumen

La infección por virus de la influenza A es una causa importante de enfermedades respiratorias, afectando diferentes especies de aves y mamíferos incluido el humano. En los cerdos, además del efecto en salud animal, representa una amenaza para la industria porcina a nivel mundial por su impacto económico. Desde el punto de vista de salud pública, la influenza plantea problemas debido a que el cerdo juega un papel importante como mediador en la transmisión inter-especie del virus. Las vacunas disponibles actualmente para la prevención de influenza en cerdos, son de tipo inactivado, por lo que proveen una protección limitada contra la infección. En Colombia, a pesar de que la infección en cerdos ha sido detectada desde hace más de cuarenta años y recientemente se han aislado cepas de virus de influenza del tipo H1N1, no existe una vacuna aprobada contra el virus de influenza en cerdos, lo cual lleva a la necesidad de desarrollar una vacuna altamente eficaz, de rápida producción y de fácil manejo con el fin de evitar la transmisión inter-especies y la generación de nuevos subtipos virales. Adicionalmente se requiere que la vacuna no represente un riesgo en cuanto a la posibilidad de recombinación con virus circulantes en los cerdos de campo y que la vacuna esté dirigida antigénica y molecularmente a los virus de influenza presentes en la especie porcina de Colombia. Con éste fin, en el presente trabajo se evaluó la capacidad antigénica de la Hemaglutinina (HA) del virus de influenza A del subtipo H1N1 en un vector de expresión de células de mamífero como un posible candidato a vacuna de virus recombinante en cerdos. Se amplificó y se clonó en un Adenovector el gen de la HA a partir de secuencias de cepas del virus de influenza porcino H1N1 aislados de cerdos en Colombia. La expresión de la proteína y amplificación del adenovector se realizó en células HEK- 293A. La antigenicidad de la proteína expresada se evalúo mediante reactividad con sueros de cerdos serológicamente positivos a influenza como resultado de la exposición natural al virus de influenza porcina H1N1. Se logró expresar la proteína HA y se demostró su reconocimiento por anticuerpos dirigidos contra el virus de influenza porcina H1N1 en sueros provenientes de cerdos de campo, lo que permitió evidenciar la presencia y conservación de epítopes existentes en la proteína recombinante. La expresión de proteínas del virus de influenza como la proteína hemaglutinina, considerado el principal determinante antigénico en los virus de influenza, en un sistema eucariótico (Adenovector) constituye un candidato para el desarrollo de una vacuna que permita prevenir y controlar la diseminación de éste agente, y que induzca una respuesta inmune protectora, al mismo tiempo que elimina la posibilidad de reordenamiento genómico., Abstract. Influenza virus infection is an important cause of respiratory disease affecting different species of birds and mammals including humans. The disease represents a threat to the swine industry worldwide and is a significant problem due to the role that pigs could play as an intermediate host in the interspecies transmission of this virus. Currently available vaccines to prevent of swine influenza are mainly inactivated and therefore they provide limited protection against the infection. In spite of having evidence of influenza virus infection on pigs in Colombia from more than forty years and the recent isolation of H1N1 SIV, vaccination againts Influenza virus is not approved in this country yet. As a result there is a need to develop a highly effective and easy to produce recombinant vaccine in order, to prevent inter-species transmission and to avoid the generation of new viral subtypes .In addition, it is higly recommended to use a virus that is antigenically and molecularly close to SIV circulating on the field in Colombian pig farms. For this reason, this study evaluated the antigenicity of the HA protein of H1N1 influenza A virus in an expression vector for mammalian cells to be used as a potential recombinant virus vaccine candidate. The hemagglutinin (HA), obtained from strains of swine influenza viruses isolated from pigs in Colombia was amplified and cloned in an adenovector. The protein expression and adenovector amplification was performed in HEK-293ª cells (Invitrogen®). The antigenicity of the expressed protein was evaluated using sera from serologically positive pigs as a result of natural exposition to swine influenza virus (H1N1). We demonstrated expression of the HA protein and its recognition by antibodies against H1N1 swine influenza virus from swine serum, allowing us to evidence the presence and conservation of epitopes in the recombinant protein. These results showed that expression of the HA protein (the major antigenic determinant of influenza virus) in an eukaryotic system is a good vaccine candidate. This could be used to prevent and/or control spread of this agent while inducing a protective immune response and prevents genomic rearrangement possibilities.

Tipo de documento:Tesis/trabajos de grado - Thesis (Maestría)
Colaborador / Asesor:Ramírez Nieto, Gloria Consuelo
Información adicional:Magister en Ciencias Microbiología. Línea de Investigación: Virología Animal
Palabras clave:Virus de influenza porcina, Vacunas, Adenovectores, Hemaglutinina, Swine Influenza Virus (SIV), Vaccines, Adenoviral, Hemagglutinin
Temática:5 Ciencias naturales y matemáticas / Science > 57 Ciencias de la vida; Biología / Life sciences; biology
6 Tecnología (ciencias aplicadas) / Technology > 63 Agricultura y tecnologías relacionadas / Agriculture
Unidad administrativa:Sede Bogotá > Facultad de Ciencias
Código ID:10708
Enviado por : Universidad Nacional de Colombia Biblioteca Digital -2-Sede Bogotá
Enviado el día :07 Noviembre 2013 18:11
Ultima modificación:07 Noviembre 2013 18:11
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