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Desarrollo de un poxvirus recombinante que expresa la glicoproteína d del herpesvirus bovino-1

Ruiz Sáenz, Julián and Osorio, Jorge Emilio and Vera Alfonso, Víctor Julio (2012) Desarrollo de un poxvirus recombinante que expresa la glicoproteína d del herpesvirus bovino-1. Acta Biológica Colombiana; Vol. 17, núm. 3 (2012); 511-524 Acta Biológica Colombiana; Vol. 17, núm. 3 (2012); 511-524 1900-1649 0120-548X .

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URL oficial: http://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/art...

Resumen

El herpesvirus bovino-1 es un virus de genoma DNA perteneciente a la familia Herpesviridae, subfamilia Alfaherpesvinae, el cual afecta al bovino, en el que provoca un amplio espectro de manifestaciones clínicas, acarreando graves pérdidas económicas. El principal componente inmunogénico de su envoltura es la glicoproteína D (gD), la cual ha sido caracterizada y utilizada como inmunógeno en distintos sistemas de expresión. Diferentes estudios han demostrado la eficacia de los vectores poxvirales como un sistema eficiente para inmunizar animales contra diferentes antígenos. El objetivo de este trabajo fue generar un poxvirusrecombinante (Raccoonpox [RCN]) que expresara una versión truncada de la gD del BHV-1 para ser usado como inmunógeno. Para ello, con ayuda de cebadores específicos se amplificó el gen que codifica para a versión truncada de la gD la cual no posee el dominio de anclaje de membrana (1,089 pares de bases), el cual posteriormente se clonó usando las enzimas EcoRI y BamHI en el plásmido de transferencia pTK/IRES/tpa que posee sitios de homología a la timidinakinasa del poxvirus, un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) y una señal secretoria (tPA), generando el constructo pTK/gD/IRES/tpa. Para generar el RCN recombinante, se tomaron células de riñón de mono verde africano BSC-1, se infectaron con una cepa Silvestre del RCN (CDC/V71-I-85A) a un Índice de Multiplicidad de Infección (MOI) de 0,05, y se incubaron a 37ºC por 90 minutos; luego, las células fueron transfectadas con el constructo pTK/gD/IRES/tpa usando el sistema de transfección FuGENE 6®; generándose a través del sistema celular de recombinación de homólogos diferentes poblaciones virales con y sin el gen de interés. Para seleccionar los virus recombinantes que expresaban el gen de interés, se realizó una selección de recombinantes negativos para timidina kinasa y positivos para la gD por tres rondas de purificación de placas en monocapas de células RAT-2 las cuales son mutantes para timidina kinasa y en presencia de bromodeoxiuridina. Los virus recombinantes se confirmaron por PCR y secuenciación de nucleótidos y se denominaron RCN-gD.

Tipo de documento:Artículo - Article
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Palabras clave:Virología, Biotecnología, Medicina Veterinaria, Clonación, ganadería, rinotraqueitis, virus.
Unidad administrativa:Revistas electrónicas UN > Acta Biológica Colombiana
Código ID:29340
Enviado por : Dirección Nacional de Bibliotecas STECNICO
Enviado el día :30 Junio 2014 02:47
Ultima modificación:29 Junio 2018 04:47
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