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Expresión de Hey1 al realizar la pérdida de función de NotchIC en las prominencias maxilar y mandibular de embriones de pollo.

Cardozo Amaya, Yorindel Juliana (2019) Expresión de Hey1 al realizar la pérdida de función de NotchIC en las prominencias maxilar y mandibular de embriones de pollo. Maestría thesis, Universidad Nacional de Colombia - Sede Bogotá.

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Resumen

La vía de señalización Notch es compleja puesto que es temporal y contexto- dependiente; durante la diferenciación celular está involucrada repetidamente en gran variedad de procesos y su modulación tiene un potencial terapéutico, promoviendo la homeostasis en los tejidos. Tanto la activación canónica como la no canónica de la vía Notch puede promover la transcripción de genes diana de la vía Notch, entre ellos Hey1. Diversos estudios han mostrado presencia de la señal de algunos componentes de la Vía Notch durante el desarrollo de las prominencias faciales, y específicamente marcación del gen diana Hey1 en las prominencias maxilar (PMx) y mandibular (PMn) de embriones de pollo. Sin embargo, no se conoce si esta marcación se deriva de procesos canónicos o no canónicos de la vía por lo que en este estudio se propuso establecer si la expresión de Hey1 en la prominencia maxilar y mandibular depende exclusivamente de la vía canónica de Notch. Para alcanzar este objetivo se hizo necesario primero, describir la expresión de los diferentes componentes de la vía Notch; y en específico, los sitios de expresión del gen diana Hey1. Enseguida, detallar la expresión de los componentes de la vía Notch en el ectodermo de las prominencias maxilar y mandibular (donde se hizo evidente su expresión); para finalmente determinar la expresión de Hey1 al inhibir la liberación de NOTCHIC (la porción intracelular del receptor Notch) en las prominencias maxilar y mandibular. Para esto, se identificó la expresión y los sitios de expresión mediante RT-PCR, hibridación in situ e inmunofluorecencia sobre cortes; se detalló la expresión en el ectodermo, mediante la separación del ectodermo y la medición de la transcripción de los diferentes componentes mediante RT-PCR y finalmente se determinó si la expresión de Hey1 se debía a la liberación de NotchIC, inhibiendo esta liberación farmacológicamente (in vitro e in vivo) usando DAPT - un inhibidor de γ-secretasa -, y midiendo la transcripción de los diferentes componentes de la vía, entre ellos Hey1, mediante RT-PCR e hibridación in situ. Los resultados obtenidos mostraron que definitivamente todos los componentes de la vía Notch que fueron estudiados están presentes en la PMx y PMn; adicional a esto todos estos componentes (a excepción de Notch2 quien solo se expresa en el ectodermo), se expresan tanto se en el ectodermo como en el mesénquima, pero, es necesaria la presencia del ectodermo para el mantenimiento de la expresión de los ligandos Jag/Ser1 y Dll1 y los genes diana Hey1 y Hey2 en el mesénquima de las prominencias (aparentemente con una activación no canónica de la vía). Y además, la expresión de los genes diana de la Vía Notch se mantiene, incluso después de haber inhibido la liberación de NotchIC. Por lo anterior se concluye que: la expresión de los componentes de la vía Notch coincide con los resultados de otros autores, confirmando que la vía Notch podría estar cumpliendo una función importante en la morfogénesis, y posiblemente en desarrollo de las estructuras derivadas de la PMx y la PMn; el ectodermo cumple una función fundamental en el mantenimiento de señales de la vía Notch en el mesénquima; y finalmente, la expresión de Hey1 en la PMx y la PMn NO depende exclusivamente de la vía canónica de Notch., Abstract: The Notch signaling path is complex, because it is temporal and context-dependent; during cell differentiation it is repeatedly involved in a great variety of processes and its modulation has a therapeutic potential, promoting homeostasis in tissues. Both canonical and noncanonical activation of the Notch pathway can promote the transcription of target genes of the Notch pathway, including Hey1. Several studies have shown the presence of the signal of some components of the Via Notch during the development of facial prominences, and specifically marking of the Hey1 target gene in the maxillary (PMx) and mandibular (PMn) prominences of chicken embryos. However, it is not known if this marking is derived from canonical or non-canonical processes of the pathway, so in this study it was proposed to establish whether the expression of Hey1 in maxillary and mandibular prominence depends exclusively on the canonical Notch pathway. In order to achieve this goal it was first necessary to describe the expression of the different components of the Notch pathway; and specifically, the sites of expression of the target gene Hey1. Next, detail the expression of the components of the Notch pathway in the ectoderm of the maxillary and mandibular prominences (where its expression became evident); to finally determine the expression of Hey1 by inhibiting the release of NOTCHIC (the intracellular portion of the Notch receptor) in the maxillary and mandibular prominences. For this, expression and expression sites were identified by RT-PCR, in situ hybridization and immunofluorescence on cuts; the expression was detailed in the ectoderm, by separating the ectoderm and measuring the transcription of the different components by RT-PCR and finally it was determined whether the expression of Hey1 was due to the release of NotchIC, inhibiting this release pharmacologically (in in vitro and in vivo) using DAPT - a γ-secretase inhibitor -, and measuring the transcription of the different components of the pathway, including Hey1, by RT-PCR and in situ hybridization. The results obtained showed that definitely all the components of the Notch pathway that were studied are present in the PMx and PMn; In addition, all these components (except for Notch2, which is only expressed in the ectoderm), are expressed both in the ectoderm and in the mesenchyme, but the presence of the ectoderm is necessary for the maintenance of the expression of the ligands Jag / Ser1 and Dll1 and the target genes Hey1 and Hey2 in the mesenchyme of the prominences (apparently with a non-canonical activation of the pathway). And in addition, the expression of the target genes of the Via Notch is maintained, even after inhibiting the release of NotchIC. Therefore, it is concluded that: the expression of the components of the Notch path coincides with the results of other authors, confirming that the Notch pathway could be playing an important role in morphogenesis, and possibly in the development of the structures derived from the PMx and the PMn; the ectoderm plays a fundamental role in maintaining signals of the Notch pathway in the mesenchyme; and finally, the expression of Hey1 in the PMx and the PMn does NOT depend exclusively on the canonical Notch mecanisms.

Tipo de documento:Tesis/trabajos de grado - Thesis (Maestría)
Colaborador / Asesor:Acosta Virgüez, Edwin and Carbonell Medina, Belfran Alcides
Información adicional:Magíster en Odontología. Línea de Investigación: Genética del Crecimiento y Malformaciones.
Palabras clave:Desarrollo Craneofacial, Anomalías congénitas, Hey1, Ectodermo, Mesénquima, Vía de señalización Notch, Congenital Abnormalities, Ectoderm, Mesenchyme, Notch signaling pathway
Temática:5 Ciencias naturales y matemáticas / Science > 57 Ciencias de la vida; Biología / Life sciences; biology
5 Ciencias naturales y matemáticas / Science > 59 Animales / Animals
Unidad administrativa:Sede Bogotá > Facultad de Odontología
Código ID:73796
Enviado por : Yorindel Juliana Cardozo Amaya
Enviado el día :11 Septiembre 2019 16:28
Ultima modificación:11 Septiembre 2019 16:28
Ultima modificación:11 Septiembre 2019 16:28
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